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带你了解流式细胞仪

文章出处: 人气:发表时间:2018-10-18 17:23
  流式细胞仪:用于细胞分选自动分析的装置。它可以快速测量、存储。悬浮显示在液体中的分散细胞的一系列重要生物物理特性参数,可根据预选参数范围对指定细胞亚群进行分类。大多数流式细胞仪是零分辨率仪器,仅测量一种细胞,例如总蛋白,总核酸等,但无法识别与测量特定位点的核酸或蛋白质的量。其细节分辨率为零。
  组成
  流式细胞仪主要由四部分组成。它们是:流动室和流动系统;激光光源和光学系统;光电管和检测系统;计算机和分析系统。上图是其结构示意图。
  光电池和检测系统
  适当的光激发后由荧光染色的细胞产生的荧光,通过将光电转换器转换成电信号来测量。光电倍增管(PMT)是最常用的。 PMT光电倍增管的响应时间很短,只有ns阶;光谱响应特性良好,光子产率在200-900nm的光谱范围内相对较高。光电倍增管的增益可以从10到10连续调节,因此对于低光测量非常有利。操作光电管时,请特别注意稳定性问题。工作电压应非常稳定,工作电流和功率不应太大。典型功耗小于0.5W;最大阳极电流为几毫安。另外,要注意光电池的暗适应,并注意良好的磁屏蔽。在使用过程中还要注意具有不同安装位置的PMT,因为光谱响应特性是不同的,不应互换。它对硅光电二极管也很有用,硅光电二极管在强光下比PMT更好。
  从PMT输出的电信号仍然很弱,需要在输入分析仪器之前进行放大。流式细胞仪通常可以使用两种类型的放大器。一种类型是输出信号辐射与输入信号之间的线性关系,称为线性放大器。线性放大器适用于在小范围内变化的信号以及代表生物线性过程的信号,例如DNA测量。另一种类型是对数放大器,其在输出信号和输入信号之间具有共同的对数关系。对数放大器通常用于免疫学测量。因为免疫学分析经常显示负的、阳性和强阳性的三个亚组,它们的荧光强度相差1-2个数量级;在多色免疫荧光测量中,对数放大器收集的数据易于解释。此外,还有调整。、细胞群分布形状不易受外部工作条件的影响。
  流动室和流动系统
  流动室由样品管、鞘管和喷嘴等组成。它通常由透明的、稳定材料制成,如光学玻璃、石英。它以非常精细的方式设计和生产,是流动系统的核心。样品管储存样品,在液体流动的压力下从样品管中排出单细胞悬浮液;鞘液通过鞘管从周边流到孔口,并在样品周边后被喷嘴包围。为了确保液体流动稳定,通常限制流速。



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